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酶免反應顯色淡、靈敏度偏低的原因及解決方案
更新時間:2025-09-17瀏覽:44次


  酶免反應顯色淡、靈敏度偏低的原因及解決方案

  一、主要原因分析

  標本問題?

  目標蛋白濃度過低?:標本中待測物質濃度低于檢測下限,導致抗原-抗體結合不足?。

  干擾物質存在?:如高濃度脂質、血紅蛋白、類風濕因子或防腐劑(如疊氮鈉)抑制反應?。

  試劑與操作問題?

  抗體效價不足?:一抗/二抗保存不當(反復凍融、過期)或稀釋比例不匹配?。

  孵育條件不當?:溫度或時間未達標(如37℃孵育不足30分鐘)?。

  洗滌不凈:殘留未結合抗體或干擾物,或洗液配制錯誤(如濃縮洗液未按比例稀釋)?。

  儀器與參數問題?

  酶標儀濾光片設置錯誤?:波長選擇不當(如TMB底物應選450nm)?。

  顯色時間不足?:TMB底物孵育時間過短(建議15分鐘以上)?。

  二、針對性解決方案

  優化標本處理?

  低濃度標本可通過超濾離心濃縮?。

  添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本以減少基質干擾?。

  驗證試劑與操作?

  檢查抗體效價,重新滴定工作濃度(如抗體套裝,效價≥1:5000)?。

  嚴格控溫控時(37℃振蕩孵育),避免酶標板干燥?。

  規范儀器使用?

  校準酶標儀波長(如TMB底物450nm)?。

  延長顯色時間(TMB孵育15分鐘)并避光操作?。

  三、擴展閱讀

  注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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