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植物達瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-258251-A 植物達瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測試劑盒
BS-258251-B 植物達瑪烷二醇合酶(DS)ELISA檢測試劑盒
一、實驗原理
植物達瑪烷二醇合酶(DS)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法，其核心步驟包括：
抗體包被：抗DS單克隆抗體預包被于96孔微孔板，形成固相捕獲層。
抗原結合：樣本或標準品中的DS與包被抗體特異性結合。
酶聯檢測：加入HRP標記的二抗，形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
顯色定量：TMB底物催化顯色，終止液作用后于450nm測定吸光度，濃度與OD值正相關。
二、試劑盒組成
組分名稱規格/濃度保存條件
預包被微孔板96孔×1塊2-8℃(干燥)
DS標準品(凍干)2瓶(0.5-100ng/mL)-20℃(長期)
生物素標記抗體120μL(1:100)-20℃(避光)
HRP-鏈霉親和素120μL(1:100)-20℃(避光)
TMB底物溶液10mL2-8℃(避光)
終止液(2M H?SO?)10mL室溫
注：所有試劑使用前需平衡至室溫(20-30min) 。
三、實驗步驟
樣品處理
植物組織樣本需研磨后提取總蛋白，離心取上清，用樣本稀釋液稀釋至推薦濃度。
加樣與孵育
每孔加入100μL標準品/樣本，37℃孵育90min。
洗滌3次(每次200μL洗滌液，靜置30s)。
檢測與顯色
加入100μL生物素標記抗體，37℃孵育60min。
洗滌后加入100μL HRP-鏈霉親和素，避光孵育30min。
加入90μL TMB底物，避光顯色15min，終止后10min內讀數。
四、數據分析
標準曲線：以標準品濃度(ng/mL)為橫坐標，OD450值為縱坐標，擬合四參數邏輯曲線。
樣本計算：根據曲線方程計算待測樣本濃度，建議復孔取平均值。
五、注意事項
靈敏度：檢測范圍0.5-100ng/mL，板內/板間變異系數<8%。
干擾因素：避免樣本反復凍融或溶血，高脂樣本需離心處理。
有效期：試劑盒自生產日起6個月內使用，部分組分需-20℃保存。
六、常見問題
問題現象可能原因解決方案
標準曲線線性差標準品復溶不充分離心后靜置10min
顯色過淺孵育時間不足延長顯色至20min
背景值高洗滌不增加洗滌次數至5次
注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。 Elisa試劑盒
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