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大鼠白介素27(IL-27)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-2900大鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞培養(yǎng)上清中的白介素27(IL-27)。IL-27是由EBI3和p28亞基組成的異源二聚體，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用?。
二、檢測原理
固相包被?：抗大鼠IL-27單抗預(yù)包被于微孔板。
復(fù)合物形成?：樣本中IL-27與包被抗體結(jié)合，加入生物素標記的檢測抗體形成夾心結(jié)構(gòu)。
酶聯(lián)反應(yīng)?：加入HRP標記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合。
顯色測定?：加入TMB底物顯色，終止液終止反應(yīng)后，在450nm波長下測定OD值，濃度與OD值呈正相關(guān)?。
三、試劑盒組分
組分 規(guī)格 儲存條件
預(yù)包被微孔板 96孔/48孔 2-8℃
標準品(凍干粉) 6個濃度梯度 -20℃
生物素標記抗體 100×濃縮液 -20℃
HRP標記鏈霉親和素 100×濃縮液 -20℃
TMB顯色液 避光保存 2-8℃
終止液(2M硫酸) 室溫 避光
濃縮洗滌液(20×) 需稀釋 室溫
樣本稀釋液 即用型 2-8℃
四、樣本要求
樣本類型?：
血清/血漿：EDTA抗凝，離心后取上清。
組織勻漿：生理鹽水勻漿，離心取上清。
細胞上清：離心去除細胞碎片。
保存條件?：
短期(≤7天)：2-8℃。
長期(>7天)：-20℃或-70℃，避免反復(fù)凍融?。
五、實驗步驟
1. 標準品配制
用樣本稀釋液復(fù)溶凍干標準品，稀釋至6個濃度梯度(如1000、500、250、125、62.5、0 pg/mL)。
2. 加樣與孵育
每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌5次，每次300μL洗滌液，拍干。
3. 抗體反應(yīng)
加入100μL生物素標記抗體，37℃孵育60分鐘。
洗滌后加入100μL HRP標記物，37℃孵育30分鐘。
4. 顯色與終止
加入90μL TMB底物，避光孵育15-20分鐘。
加入50μL終止液終止反應(yīng)?。
5. 檢測
酶標儀450nm波長測定OD值。
六、結(jié)果計算
以標準品濃度為橫坐標(X)，OD值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。
樣本濃度根據(jù)OD值從標準曲線中讀取，若超出范圍需稀釋后復(fù)測?。
七、技術(shù)參數(shù)
參數(shù) 指標
檢測范圍 15.6-1000 pg/mL
靈敏度 ≤5.7 pg/mL
精密度(批內(nèi)/批間) CV <10%/CV <12%
回收率 血清91%、EDTA血漿93%、肝素血漿94%
八、注意事項
試劑保存?：
未開封試劑盒：-20℃保存1年。
開封后：4℃保存1周，長期需分裝-20℃。
操作規(guī)范?：
避免溶血、脂血樣本。
洗滌需凈，拍干后立即下一步。
終止液為酸性，需防護皮膚和眼睛?。
質(zhì)量控制?：
每批實驗設(shè)空白孔和標準曲線，R2需>0.95。
樣本稀釋后需重新檢測。
九、常見問題
OD值過高?：樣本濃度過高，需稀釋。
顯色不均?：檢查洗滌或加樣準確性。
線性差?：重新配制標準品或更換試劑?。
十、適用范圍
本試劑盒僅供科研使用，不可用于臨床診斷?。
注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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